Fiche de cours
Travaux pratiques de biologie moléculaire
Practical Work in Molecular Biology
Faculté de gestion: Ecole de biologie (FBM-BIO)
Responsable(s): Christiane Nawrath, Pascal Schneider, Vladimir Sentchilo, Johann Weber
Pas d'horaire défini.
Travaux pratiques
Semestre d'automne
112 heures par semestre
Langue(s) d'enseignement: anglais, français
Public: Non
Crédits: 0
Objectif
1) Apprendre un large éventail des techniques modernes utilisées en biologie moléculaire.
2) Apprendre comment ces techniques sont utilisées pour un projet de recherche bien défini afin de comprendre la conception logique des expériences.
3) Apprendre à interpréter les résultats obtenus et la façon de les communiquer sous forme d'un rapport scientifique et / ou d'une présentation orale.
Contenu
Les TP sont donnés par cinq départements (CIG, DB, DMF, DBMV, IBT) en blocs parallèles entre lesquels les étudiants peuvent choisir. Chaque TP contient son propre "thème", ce qui, comme une ligne rouge, permet aux étudiants d'appliquer successivement les différentes techniques afin de répondre au problème scientifique. Bien que la plupart des méthodes soient utilisées dans les cinq blocs, certaines sont plus spécifiques à un thème précis.
Les 4 thèmes sont:
CIG: P53 - du clonage d'ADNc à l'étude de localisation in vivo dans les cellules de mammifères
DB: Famille du TNF. Clonage, expression et purification de protéines recombinantes
DMF: Analyse moléculaire du métabolisme de 2-hydroxybiphenyl dans Pseudomonas azelaica
DBMV: Caractérisation de la lipoxygènase LOX1 d'Arabidopsis thaliana
Les techniques utilisées dans les 5 blocs sont:
Isolation d'ADN (tous)
PCR (tous)
Analyse avec enzymes de restriction (tous)
Clonage d'ADN (tous)
Séquençage d'ADN (tous)
Southern blot (DMF)
Isolation d'ARN (DMF, DB, DBMV, IBT)
Synthèse d'ADNc (CIG, DB, DBMV, IBT)
Northern blot (DMF, DBMV)
PCR quantitative avec SYBR Green (DB, DBMV, IBT)
Surexpression des protéines (tous)
ELISA (DB, IBT)
SDS PAGE (tous)
Western blot (tous)
Purification des protéines par affinité (CIG, DB)
Filtration sur gel, déglycosylation, immunoprécipitations (DB)
Extraction et analyse de lipides (DB)
Cinétique enzymatique (DMF)
Système rapporteur Lux et/ou GFP (CIG, DMF, DBMV, IBT)
Microscopie à fluorescence (CIG, DB, IBT, DBMV)
Mutagenèse par transposon ou mutagenèse dirigée (CIG, DB, DMF)
Génotypage des mutants ADN-T (DBMV)
Culture de cellules et transfection (CIG, DB, IBT)
Analyse de cellules par FACS (IBT)
Evaluation
La note des travaux pratiques tient compte du travail en laboratoire et des présentations finales (orales et écrites).
Bibliographie
Polycopies donnés par les 4 départements au début des travaux pratiques.
Exigences du cursus d'études
Cours de biologie moléculaire donné par E. Farmer